பாலிமரேசு தொடர் வினை

மூலக்கூற்று உயிரியலில் பாலிமரேசு தொடர் வினை (Polymerase chain reaction அல்லது PCR) என்ற நுட்பத்தை பயன்படுத்தி, மரபு நூலிழையின் (DNA) குறிப்பிட்ட சிறு பகுதியை பல்லாயிரக்கணக்கில் பெருக்க முடியும்.

பொதுவாக இவ்வினை மூன்று நிலைகளை கொண்டுள்ளது.

க. பிரித்தல் (denaturation)
௨. சேர்த்தல் (Anneling)
௩. நீட்டித்தல் (extension)

செய்முறை பொருள்கள்

பாலிமரேசு தொடர்வினைக்கான வரைபடம். (1) 94–96 °C இல் பிரிப்பு (2) ~65 °C இல் சேர்ப்பு (3) 72 °C இல் நீட்டிப்பு. Four cycles are shown here. The blue lines represent the DNA template to which primers (red arrows) anneal that are extended by the DNA polymerase (light green circles), to give shorter DNA products (green lines), which themselves are used as templates as PCR progresses.

௧. டி. என். ஏ பாலிமரேசு நொதி
௨. டி. என். பி (DNTPs, Deoxyribo nucleotides) அடிநின், தயமின், சைடோசைனின், குவானின்
௩. மெக்னீசியம் குளோரைடு (MgCl2) அல்லது மெக்னீசியம் சல்ஃபேட் (MgSo4)- நொதிகளைப் பொருந்து அமையும்.
௪. மரபு நூலிழை (DNA, template)
௫. ப்ரைமர் (primer)

பிரித்தல்

மரபு நூலிழை (DNA) இரு சுழல்களாக (double helix) சுற்றி இணைக்கப்பட்ட அமைப்பாகும். இந்நிகழ்வின் போது, வெப்பநிலை ௯௪ செல்சிசசில் இரு சுழழ்கள் பிரிக்கப்படும்.

சேர்த்தல்

இந்நிகழ்வில் வரும் வெப்பநிலை ப்ரிமேரை (primer) பொருந்து அமையும். பிரித்தலில் பிரிக்கப்பட்ட மரபு நூலிழை ஒன்றிணைய பொழுது, ப்ரிமேர் குறிபிட்ட , அதனோடு தொடர்போடு பகுதியில் சேரும்.

நீட்டித்தல்

இந்நிகழ்வில் மரபு நூலிழை பல்கி நகலாக பெருக்கப்படும் (Amplification). வெப்பநிலை ௬௮- ௭௨ செல்சிசஸ் அமைக்கலாம். மரபு நூலிழை நொதி (DNA polymerase) மிக வெப்பநிலையில் (எரிமலையில்) வாழும் பக்டேரியாவில் பிரித்தெடுக்கபட்டுள்ளதால், குறைவான வெப்பநிலையில் (௩௭ செ ) பாலிமரேஷ் வினை (Polymerase chain reaction PCR) இயலாது.

பாலிமரேசு தொடர் வினை வகைகள்:

௧. பல்கல (colony) பி.சி.ஆர்.

௨.ஆர். டி. பி.சி.ஆர். (ஆர்.என்.எ வை சி.டி.என்.எ வாக மற்றும் நுட்பம்)

௩. அளவு காண் பி.சி.ஆர். (quantification PCR) - இவ் நுட்பத்தால் மரபணு வெளிப்படுதலின் அளவுகளை காணலாம்.

௪. immuno captured பி.சி.ஆர். இந் முறையில் எதிர்-உடல் (antobody) பயன்படுத்தி, டி.என்.எ களை பிடித்து, பல்கி பெருக்கி பார்க்கலாம்.

௫.தலைகீழ் பி.சி.ஆர். இந் நுட்பம் வட்ட வடிவிலான டி.என்.எ களை பல்கி பெருக்க பயன்படுத்த படுகிறது. மேலும் முழு டி.என்.எ. களை (sequences) பெறலாம்.

௬. nested PCR

௭. AFLP PCR

௮. Allele-Specific PCR

௯. ஒரு கல பி.சி.ஆர். (single cell PCR)

பாலிமரேஸ் (PCR) ஒரு குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ வரிசையை பிரதிகளை மில்லியன் கணக்கான ஆயிரக்கணக்கான உருவாக்க, பல அடுக்கு பரிமாணங்கள் முழுவதும் டிஎன்ஏ ஒரு துண்டு ஒரு ஒற்றை அல்லது ஒரு சில பிரதிகளை பெருக்க மூலக்கூறு உயிரியலில் ஒரு உயிர்வேதியியல் தொழில்நுட்பம் ஆகும்.

கேரி Mullis மூலம் 1983 ல் உருவாக்கப்பட்ட, [1] PCR இப்போது பயன்பாடுகள் பல்வேறு மருத்துவ மற்றும் உயிரியல் ஆய்வு கூடம் பயன்படுத்தப்படும் ஒரு பொதுவான மற்றும் பெரும்பாலும் தவிர்க்க முடியாத நுட்பம் ஆகும். [2] [3] வரிசைப்படுத்துவதன், டிஎன்ஏ சார்ந்த ஃபைலோகனி சோதனை செய்ய இவற்றுள் டிஎன்ஏ குளோனிங், அல்லது செயல்பாட்டு மரபணுக்கள் பகுப்பாய்வு; பரம்பரை நோய்களின் நோயறிதல்; மரபணு கைரேகைகள் (தடயவியல் அறிவியல் மற்றும் தந்தை சோதனை பயன்படுத்தப்படுகிறது) அடையாளம்; மற்றும் தொற்று நோய்கள் கண்டறிதல் மற்றும் கண்டறிதல். 1993 இல், Mullis PCR தனது வேலை மைக்கேல் ஸ்மித் இணைந்து வேதியியலுக்கான நோபல் பரிசு வழங்கப்பட்டது. [4]

முறை திரும்ப திரும்ப வெப்பமூட்டும் சுழற்சியை கொண்ட மற்றும் டிஎன்ஏ உருகும் மற்றும் டிஎன்ஏ நொதித்தல் நகல் பிற்போக்கு குளிர்விக்க, வெப்ப சுழற்சி நம்பியுள்ளது. ஒரு டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் (இது பின்னர் முறை பெயரிடப்பட்டது) இணைந்து இலக்கு பகுதியில் பூர்த்தி காட்சிகளை கொண்ட முதன்மைபாட நூல்கள (குறுகிய டிஎன்ஏ துண்டுகள்) தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட மற்றும் தொடர்ச்சியாக பெருக்கி செயல்படுத்த முக்கிய கூறுகள் உள்ளன. PCR அதிகரிக்கையில், உருவாக்கப்பட்ட டி.என்.ஏ. தன்னை இயக்கத்தில் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் அதிவேகமாக பெருக்கப்படுகிறது இது ஒரு சங்கிலி எதிர்வினை அமைக்க, போலிகளை ஒரு வார்ப்புருவாக பயன்படுத்தப்படும் இருக்கிறது. PCR விரிவான மரபணு செய்கைமுறைகளையும் ஒரு பரவலான செய்ய திருத்தினோம்.

கிட்டத்தட்ட அனைத்து PCR பயன்பாடுகள் Taq பாலிமரேஸ், முதலில் பாக்டீரியம் Thermus aquaticus இருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டு ஒரு என்சைம், ஒரு வெப்ப நிலையாக டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் பயன்படுத்துகின்றனர். இந்த டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் என்சைம்கள்ரீதியாக டிஎன்ஏ தொகுப்பு தொடங்கப்படுவதற்கு தேவையான எந்த ஒரு டெம்ப்ளேட் மற்றும் டிஎன்ஏ ஒலிகோநியூக்ளியோடைட் (அழைக்கப்படும் டிஎன்ஏ முதன்மைபாட நூல்கள), போன்ற ஒற்றை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ மூலம் டிஎன்ஏ கட்டிடம்-தொகுதிகள், நியூக்ளியோட்டைடுகள், ஒரு புதிய டிஎன்ஏ அறுத்து ஒன்றுகூடுகின்றனர். PCR முறைகள் பெரும்பாலான வெப்ப சைக்கிள், அதாவது, மாறி மாறி வெப்பமூட்டும் மற்றும் வெப்பநிலை வழிமுறைகளை ஒரு வரையறுக்கப்பட்ட தொடர் PCR மாதிரி குளிர்விக்க பயன்படுத்த. இந்த வெப்ப சைக்கிள் நடவடிக்கைகளை உடல் டிஎன்ஏ உருகும் என்று அழைக்கப்படும் செயல்பாட்டில் அதிக வெப்பநிலையில் ஒரு DNA இரட்டை சுருளின் இரு இழைகளாக பிரிக்க முதல் தேவை. குறைவான வெப்பநிலையில், ஒவ்வொரு அறுத்து பின் தேர்ந்தெடுத்து இலக்கு டிஎன்ஏ பெருக்க டிஎன்ஏ பாலிமெரேசால் தொகுப்பின் டெம்ப்ளேட் பயன்படுத்தப்படுகிறது. குறிப்பிட்ட வெப்ப சைக்கிள் நிலைமைகளின் கீழ் பெருக்கி இலக்கு டிஎன்ஏ பகுதியில் ஈடுசெய்யும் என்று முதன்மைபாட நூல்கள பயன்பாடு இருந்து PCR முடிவுகள் தேர்ந்தெடுக்கும்.

பொருளடக்கம்

    1 PCR கொள்கைகள் மற்றும் நடைமுறைகள்
        1.1 முறைகள்
    2 PCR நிலைகளில்
        2.1 PCR ஆப்டிமைசேஷன்
    PCR 3 விண்ணப்பம்
        3.1 தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ தனிமை
        3.2 பெருக்கம் மற்றும் டிஎன்ஏ அளவீடு
        நோய்களை கண்டறிவதில் 3.3 PCR
    அடிப்படை PCR நுட்பம் 4 மாறுபாடுகள்
    5 வரலாறு
        5.1 காப்புரிமை போர்கள்
    6 குறிப்புகள்
    7 வெளி இணைப்புகள்

PCR கொள்கைகள் மற்றும் நடைமுறைகள் படம் 1a: PCR ஒரு வெப்ப cycler படம் 1b: PCR ஒரு பழைய மாடல் மூன்று வெப்பநிலை வெப்ப cycler

PCR டிஎன்ஏ இழை (டிஎன்ஏ இலக்கு) ஒரு குறிப்பிட்ட பகுதியில் பெருக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. மிகவும் PCR முறைகள் பொதுவாக வரை டிஎன்ஏ துண்டுகள் பெருக்க ~ 10 கிலோ அடிப்படை ஜோடிகள் (kb), சில நுட்பங்கள் அளவு 40 kb செய்ய துண்டுகள் பெருக்கத்திற்காக அனுமதிக்க எனினும் வேண்டும். [5] எதிர்வினை ஆட்சி என்று இறுதி பெருக்கப்படுகிறது தயாரிப்பு ஒரு மட்டுப்படுத்தப்பட்ட அளவு உற்பத்தி விளைவு பொருட்களை எதிர்வினை மற்றும் கருத்துக்களை-தடுப்பு கிடைக்க reagents மூலம். [6]

. அமைக்க ஒரு அடிப்படை PCR பல கூறுகள் மற்றும் reagents வேண்டும் [7] இந்த கூறுகள் பின்வருமாறு:

   டிஎன்ஏ பகுதியில் கொண்டிருக்கும் DNA டெம்ப்ளேட் (இலக்கு) பெருக்கப்பட்டு வேண்டும்.
   3 முழுமை என்று இரண்டு முதன்மைபாட நூல்கள '(மூன்று பிரதம) டிஎன்ஏ இலக்கு உணர்வு மற்றும் எதிர்ப்பு உணர்வு இழையில் ஒவ்வொரு முடிவடைகிறது.
   சுமார் 70 ° சி ஒரு வெப்பநிலை உகந்த உடன் Taq பாலிமரேஸ் அல்லது மற்றொரு டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ்
   Deoxynucleoside முப்பாஸ்பேட்டுகளிலிருந்தான (dNTPs; டிரைபாஸ்பேட் குழுக்கள் கொண்ட நியூக்ளியோட்டைடுகள்), கட்டிட-தொகுதிகள் எந்த டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் ஒரு புதிய டிஎன்ஏ அறுத்து ஒன்றிணைக்கிறது.
   டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் சரியான செயல்பாடு மற்றும் நிலைப்பு ஒரு பொருத்தமான இரசாயன சூழலை வழங்கும் தாங்கல் கரைசல்,.
   Divalent எதிரயனிகளை, மெக்னீசியம் அல்லது மாங்கனீசு அயனிகள்; பொதுவாக Mg2 + பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஆனால் Mn2 + அதிக Mn2 என, PCR செயலாற்று டிஎன்ஏ மரபணு மாற்ற பயன்படுத்தப்படும் + செறிவு டிஎன்ஏ தொகுப்பு [8] போது பிழை விகிதம் அதிகரிக்கிறது
   Monovalent எதிரயனி பொட்டாசியம் அயனிகள்.

PCR பொதுவாக ஒரு வெப்ப cycler உள்ள (0.2-0.5 மில்லி அளவு) சிறிய எதிர்வினை குழாய்களை 10-200 μl ஒரு எதிர்வினை தொகுதி மேற்கொள்ளப்படுகிறது. வெப்ப cycler வெப்பப்படுத்துகிறது மற்றும் பிற்போக்கு ஒவ்வொரு அடியிலும் (பார்க்க கீழே) தேவையான வெப்பம் அடைய எதிர்வினை குழாய்கள் குளிர்ந்திருக்கிறது. பல நவீன வெப்ப cyclers வெப்பமூட்டும் மற்றும் வெறுமனே மின்சார எதிர்த்திசையில் PCR குழாய்கள் வைத்திருக்கும் தொகுதி குளிர்ச்சி இரண்டு அனுமதிக்கிறது இது பெல்டியர் விளைவு, பயன்படுத்த. மெல்லிய சுவர் எதிர்வினை குழாய்கள் சாதகமான வெப்பக்கடத்து விரைவான வெப்ப சமநிலையாக்கல் அனுமதிக்க அனுமதி. மிகவும் வெப்ப cyclers எதிர்வினை குழாய் மேலே ஒடுக்க தடுக்க இமைகளுக்கு வெப்பம். ஒரு சூடான மூடி இல்லாத பழைய thermocyclers எதிர்வினை கலவையை மேல் எண்ணெய் ஒரு அடுக்கு அல்லது குழாய் உள்ளே மெழுகு ஒரு பந்து தேவைப்படுகிறது. செயல்முறை படம் 2: PCR சுழற்சி உருவரைபடம். (1) 94-96 மணிக்கு Denaturing ° சி (2) 72 மணிக்கு ~ 65 டிகிரி செல்சியஸ் (3) விரிவாக்குதல் உள்ள தூண்டு ° சி நான்கு சுழற்சிகள் இங்கே காட்டப்படுகின்றன. நீல கோடுகள் முதன்மைபாட நூல்கள (சிவப்பு அம்பு) தங்களை PCR முன்னேற்றங்களாகி டெம்ப்ளேட்டாக பயன்படுத்தப்படும் சிறிய டிஎன்ஏ பொருட்கள் (பச்சை கோடுகள்), கொடுக்க, டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் (வெளிர் பச்சை வட்டங்களில்) விரிவுபடுத்தப்பட்டது என்று கண்ணாடி (அ) உலோகம் போன்றவற்றை சூடேற்றி குளிர வைத்து பதப்படுத்து எந்த டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் பிரதிநிதித்துவம்.

பொதுவாக, PCR ஒவ்வொரு சுழற்சி பொதுவாக 2-3 தனி வெப்பநிலை படிகள், பொதுவாக மூன்று (Fig. 2) கொண்ட ஒரு சுழற்சிகள் என்று 20-40 மீண்டும் வெப்பநிலை மாற்றங்களை தொடர்ந்து, கொண்டுள்ளது. சைக்கிள் பெரும்பாலும் அதிக வெப்பநிலையில் ஒரு வெப்பநிலை படி (பிடி என்று) (> 90 டிகிரி செல்சியஸ்) முன்பாக, மற்றும் இறுதி தயாரிப்பு விரிவாக்கம் அல்லது குறுகிய சேமிப்பு முடிவில் ஒரு பிடி தொடர்ந்து வருகிறது. பயன்படுத்தப்படும் வெப்பநிலை மற்றும் அவர்கள் ஒவ்வொரு சுழற்சியில் பயன்படுத்தும் கால அளவு அளவுருக்கள் பல்வேறு சார்ந்தது. இந்த முதன்மைபாட நூல்கள என்ற டிஎன்ஏ தொகுப்பு, வினையில் divalent அயனிகள் மற்றும் dNTPs செறிவு, மற்றும் உருகும் வெப்பநிலையை (Tm) பயன்படுத்தப்படுகிறது என்சைம் ஆகியவை அடங்கும். [9]

   துவக்கும் படி: இந்த நடவடிக்கை 94-96 ஒரு வெப்பநிலை எதிர்வினை வெப்பத்தை கொண்டுள்ளது ° சி (அல்லது 98 டிகிரி செல்சியஸ் மிகவும் thermostable பாலிமெரேஸ்களிடையே பயன்படுத்தப்படுகின்றன என்றால்), 1-9 நிமிடங்கள் நடைபெறும். இது தான் சூடான தொடக்க PCR வெப்ப செயல்படுத்தும் தேவைப்படும் டிஎன்ஏ பாலிமெரேஸ்களிடையே தேவைப்படுகிறது. [10]

   இயல்புநீக்கம் நடவடிக்கை: இந்த படிநிலை முதல் வழக்கமான சைக்கிள் நிகழ்வு மற்றும் 20-30 வினாடிகள் 94-98 டிகிரி செல்சியஸ் எதிர்வினை வெப்பத்தை கொண்டுள்ளது. அது ஒற்றை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை விளைவிக்கின்றது, பூர்த்தி தளங்கள் ஹைட்ரஜன் பிணைப்பு தடை மூலம் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டின் டிஎன்ஏ உருகும் ஏற்படுத்துகிறது.

   படி தூண்டு: எதிர்வினை ° C வெப்பநிலை ஒற்றை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டில் முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு தூண்டு அனுமதிக்கிறது 20-40 வினாடிகள் 50-65 வரை குறைகிறது. பொதுவாக தூண்டு வெப்பநிலை பயன்படுத்தப்படும் முதன்மைபாட நூல்கள என்ற Tm கீழே செல்சியஸ் 3-5 டிகிரி ஆகும். குழாய் வரிசை மிக நெருக்கமாக டெம்ப்ளேட் வரிசை பொருந்தும் போது நிலையான டிஎன்ஏ-டிஎன்ஏ ஹைட்ரஜன் பத்திரங்கள் மட்டுமே உருவாகின்றன. பாலிமரேஸ் அறிமுகம்-டெம்ப்ளேட் கலப்பு ஆகிறது மற்றும் டிஎன்ஏ உருவாக்கம் தொடங்குகிறது.

   விரிவாக்க / நீட்சி நடவடிக்கை: இந்த அடியிலும் வெப்பநிலை பயன்படுத்தப்படும் டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் சார்ந்துள்ளது; Taq பாலிமரேஸ் ° C, [11] [12] பொதுவாக 72 ஒரு ° C வெப்பநிலை இந்த என்சைம் பயன்படுத்த படுகிறது 75-80 அதன் சரியான நடவடிக்கை வெப்பநிலை உள்ளது . இந்த அடியிலும் டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் 3'-ஹைட்ராக்சில் உடன் dNTPs ஒரு 5'-பாஸ்பேட் குழு ஒடுக்க, 5 '3' திசையில் டெம்ப்ளேட் முழுமை என்று dNTPs சேர்ப்பதன் மூலம் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் அறுத்து முழுமை புதிய டிஎன்ஏ அறுத்து ஒன்றிணைக்கிறது ஆரம்பகட்டத்தில் (விரிவாக்கம்) டிஎன்ஏ இழையின் முடிவில் குழு. நீட்டிப்பு நேரம் பயன்படுத்தப்படுகிறது டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் மற்றும் பெருக்கவும் வேண்டும் டிஎன்ஏ துண்டின் நீளம் இரண்டு பொறுத்தது. ஒரு விதி பற்றி, கட்டை விரல் போல், அதன் சரியான வெப்பநிலையில், டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் நிமிடத்திற்கு ஒரு ஆயிரம் தளங்கள் polymerize. ஒவ்வொரு விரிவாக்க அடியிலும் கட்டுப்படுத்தும் அடி மூலக்கூறு அல்லது reagents காரணமாக இல்லை வரம்புகள் இருந்தால் உகந்த நிலைமைகளின் கீழ், அதாவது, டிஎன்ஏ இலக்கு அளவு குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ துண்டின் அடுக்கடுக்கான (வடிவியல்) பெருக்கம் இதனால், இரு மடங்காக உள்ளது.

   இறுதி நீட்சி: இந்த ஒற்றை எப்போதாவது எந்த மீதமுள்ள ஒற்றை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ முழுமையாக நீட்டிக்க வேண்டும் என்பது கடந்த PCR சுழற்சி பின்னர் 5-15 நிமிடங்கள் 70-74 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் செய்யப்படுகிறது.

   இறுதி நடத்த: காலவரையற்ற நேரம் 4-15 டிகிரி செல்சியஸ் இந்த நடவடிக்கை விளைவு குறுகிய கால சேமிப்பு நிறுவப்படுகின்றன.

படம் 3: Ethidium புரோமைடு கறை படிந்த PCR தயாரிப்புகள் ஜெல் மின் பிறகு. முதன்மைபாட நூல்கள இரண்டு செட்கள் மூன்று வெவ்வேறு திசு மாதிரிகளை இருந்து ஒரு இலக்கு வரிசை பெருக்க பயன்படுத்தப்பட்டன. இல்லை பெருக்கி மாதிரி # 1 இருக்கிறது; மாதிரி # 2 மற்றும் # 3 இல் டிஎன்ஏ பட்டைகள் இலக்கு வரிசை வெற்றிகரமாக பெருக்கி காட்டும். ஜெல் ஒரு நேர்மறையான கட்டுப்பாடு, மற்றும் சோதனை PCRs உள்ள பட்டைகள் அளவிடல் வரையறுக்கப்படுகிறது நீளம் டிஎன்ஏ துண்டுகள் கொண்ட ஒரு டிஎன்ஏ ஏணி காட்டுகிறது.

PCR எதிர்பார்க்கப்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டு (சில சமயங்களில் amplimer அல்லது amplicon என குறிப்பிடப்படுகிறது) உருவாக்கப்பட்டது என்பதை சரிபார்க்க, agarose ஜெல் மின் PCR பொருட்களின் அளவு பிரிப்பு பணியாற்றுகிறது. PCR பொருட்கள் அளவு (கள்) தெரிந்த அளவு டிஎன்ஏ துண்டுகள் கொண்ட ஒரு டிஎன்ஏ ஏணி (ஒரு மூலக்கூறு எடை மார்க்கர்), ஒப்பிடுகையில் தீர்மானிக்கப்படுகிறது, (படம் பார்க்க. 3) PCR தயாரிப்புகள் இணைந்து ஜெல் இயங்கும். PCR நிலைகளில்

PCR செயல்முறை மூன்று நிலைகளில் பிரிக்கலாம்:

அதிவேகமான பெருக்கம்: ஒவ்வொரு சுழற்சியின் போது, தயாரிப்பு அளவு இருமடங்காக (100% வினை திறன் விட்டிருக்கலாம்). விளைவு மிக முக்கியமான உள்ளது: டிஎன்ஏ மட்டுமே நிமிடம் அளவில் இருக்க வேண்டும் [13].

மேடையில் கள்: டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் நடவடிக்கை இழக்கிறது மற்றும் போன்ற dNTPs மற்றும் முதன்மைபாட நூல்கள என reagents நுகர்வு அவர்களை கட்டுப்படுத்தும் ஆக ஏற்படுத்துகிறது என வினை வேகத்தை.

பீடபூமி: இல்லை இன்னும் தயாரிப்பு reagents மற்றும் என்சைம் சோர்வு காரணமாக பெருக. PCR ஆப்டிமைசேஷன் முதன்மை கட்டுரை: PCR ஆப்டிமைசேஷன்

நடைமுறையில், PCR போலியான டிஎன்ஏ பொருட்கள் கலப்படம் காரணமாக பெருக்கி அதன் உணர்வு காரணமாக பகுதியில், பல்வேறு காரணங்களுக்காக தோல்வியடையும். இந்த காரணமாக, நுட்பங்கள் மற்றும் நடைமுறைகள் பல PCR நிலைமைகள் ஒருங்கிணைப்பதற்கும் உருவாக்கப்பட்டு வருகின்றன. [14] [15] புறம்பான DNA உடன் மாசடையும் ஆய்வு நெறிமுறைகள் மற்றும் நடைமுறைகள் கொண்டு உரையாற்றினார் திறன் டிஎன்ஏ அசுத்தங்கள் இருந்து தனி முன் PCR கலவைகள். [7] இது என்று பொதுவாக PCR பொருட்களை பகுப்பாய்வு அல்லது சுத்தம் பகுதிகளில் இருந்து PCR-அமைப்பு பகுதிகளில் சார்ந்த பிரிவு ஈடுபட்டுள்ளது, களைந்துவிடும் plasticware பயன்படுத்த, மற்றும் முற்றிலும் எதிர்வினை நிறுவல்களை இடையே வேலை மேற்பரப்பில் சுத்தம். அறிமுகம்-வடிவமைப்பு உத்திகள் PCR தயாரிப்பு மகசூல் அதிகரிக்கிறது மற்றும் போலியான பொருட்கள் உருவாக்கத்திற்கு தவிர்த்து முக்கியமானவை, மற்றும் மாற்று இடையகம் கூறுகள் அல்லது பாலிமரேஸ் என்சைம்களின் பயன்பாடு டிஎன்ஏ நீண்ட அல்லது பிரச்சினைக்குரிய பகுதிகளில் பெருக்கி கொண்டு உதவ முடியும். தாங்கல் அமைப்புகளில் போன்ற formamide என reagents, கூடுதலாக PCR வரையறுப்பு மற்றும் மகசூல் அதிகரிக்கும். [16] கோட்பாட்டு PCR முடிவுகள் (எலக்ட்ரானிக் PCR) கணினி உருவகப்படுத்துதல்கள் அறிமுகம் வடிவமைப்பில் உதவ செய்யப்படலாம். [17] PCR பயன்பாடு முதன்மை கட்டுரை: PCR பயன்பாடுகள் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட டிஎன்ஏ தனிமை

PCR டிஎன்ஏ ஒரு குறிப்பிட்ட பகுதியில் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பெருக்கி மூலம் மரபணு டிஎன்ஏ இருந்து டிஎன்ஏ துண்டுகள் தனிமை அனுமதிக்கிறது. ஒரு குறிப்பிட்ட டிஎன்ஏ பகுதியில் குறிக்கும் டிஎன்ஏ பெரிய அளவு, தேவைப்படும் தெற்கு அல்லது வடக்கு கலப்பு மற்றும் டிஎன்ஏ குளோனிங், ஒரு கலப்பு ஆய்வுகளை உருவாக்குவது போன்ற PCR கலவையாகும் பல முறைகள், இந்த பயன்பாடு. PCR கூட பொருள் தொடங்கி மிக சிறிய அளவிலான டிஎன்ஏ மாதிரிகளை பகுப்பாய்வு செயல்படுத்த, தூய டிஎன்ஏ அதிக அளவு இந்த உத்திகளை வழங்குகிறது.

PCR மற்ற பயன்பாடுகளுக்கு பெருக்கி முதன்மைபாட நூல்கள ஒன்று ஒரு பிளாஸ்மிட் அல்லது ஒரு டிஎன்ஏ வரிசை செருகும் சம்பந்தப்பட்ட மறுஇணைவு DNA தொழில்நுட்பங்கள் விரைவுபடுத்துவதற்கு சங்கர் வரிசைமுறை, டிஎன்ஏ வரிசை தனிமை பயன்படுத்தப்படும் இதில் தெரியவில்லை PCR பெருக்காத காட்சிகளை தீர்மானிக்க வரிசை டிஎன்ஏ அடங்கும் மற்றொரு உயிரினத்தின் மரபணு. பாக்டீரியா காலனிகளில் (ஈ) விரைவில் சரியான டிஎன்ஏ வெக்டார் கட்டமைப்புகளை PCR மூலம் திரையிடப்பட்டது முடியும் [18] PCR மேலும் மரபணு கைரேகை பயன்படுத்தப்படுகிறது;. ஒரு தடயவியல் நுட்பம் பல்வேறு PCR சார்ந்த மூலம் சோதனை DNAs ஒப்பிடுவதன் மூலம் ஒரு நபர் அல்லது உயிரினம் அடையாளம் காண பயன்படுகிறது முறைகள். [மேற்கோள் தேவை]

சில PCR 'கைரேகைகள்' முறைகள் உயர் பாரபட்சமான அதிகாரம் மற்றும் பெற்றோர், குழந்தை அல்லது உடன்பிறப்புகள் இடையே தனிநபர்கள் இடையே மரபணு உறவுகளை, அடையாளம் பயன்படுத்தலாம், மற்றும் (Fig. 4) தந்தை சோதனை பயன்படுத்தப்படுகின்றன. இந்த உத்தியை மேலும் உயிரினங்கள் மத்தியில் பரிணாம உறவுகளில் தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. [சான்று தேவை] படம் 4: PCR பெருக்காத டிஎன்ஏ துண்டுகள் மின். (1) தந்தையின். (2) குழந்தைகள். (3) தாய். குழந்தை சில மரபு, ஆனால் அதன் பெற்றோர்கள் ஒவ்வொரு கைரேகை, இது ஒரு புதிய, தனிப்பட்ட கைரேகை கொடுக்கும். பெருக்கம் மற்றும் டிஎன்ஏ அளவீடு

PCR அது இலக்கு என்று டிஎன்ஏ பகுதிகளில் அதிகரிக்கிறது ஏனெனில், PCR மாதிரி மிக சிறிய அளவிலான ஆய்வு செய்ய பயன்படுத்தலாம். இந்த அடிக்கடி டிஎன்ஏ ஒரு சுவடு அளவு ஆதாரங்கள் கிடைக்க போது தடயவியல் ஆய்வு, மிகவும் முக்கியமான ஒன்றாக உள்ளது. PCR பழைய ஆண்டுகளில் பல்லாயிரக்கணக்கான என்று பண்டைய டிஎன்ஏ பகுப்பாய்வு பயன்படுகிறது. இந்த PCR சார்ந்த நுட்பங்கள் வெற்றிகரமாக எகிப்திய mummies ஆய்வு இருந்து ஒரு ரஷியன் ருசிய நாட்டு மன்னர் அடையாளம் வரை பயன்பாடுகளில், மனித டிஎன்ஏ மீது மேலும் ஒரு நாற்பது ஆயிரம் வயதான ஆகப்பெரிய போன்ற விலங்குகள், பயன்படுத்தப்படும், மற்றும். [19]

அளவு PCR முறைகள் அளவு மரபணு வெளிப்பாட்டின் அளவுகளை தீர்மானிக்க அடிக்கடி பயன்படுத்தப்படும் ஒரு மாதிரி ஒரு நுட்பத்தை ஒரு குறிப்பிட்ட வரிசை அளவு கணக்கிட தற்போது அனுமதிக்கிறது. நிகழ் நேர PCR PCR பெருக்கம் ஒவ்வொரு சுற்று பின்னர் டிஎன்ஏ தயாரிப்பு திரட்சியின் அளவிடும் டிஎன்ஏ குவாண்டிஃபிக்கேஷன் ஒரு நிறுவப்பட்ட கருவி.

   தடயவியல் பூச்சிகளை பற்றிய ஆய்வு உள்ள டிஎன்ஏ பயன்படுத்தவும் மேலும் பார்க்க

நோய்களை கண்டறிவதில் PCR

PCR தற்போது புற்றுநோய் ஆராய்ச்சி அதிக அபிவிருத்தி மற்றும் ஏற்கனவே வழக்கமாக பயன்படுத்தப்படுகிறது இது போன்ற லுகேமியா மற்றும் லிம்போமா போன்ற வீரியமிக்க நோய்களின், ஆரம்ப கண்டறிய அனுமதிக்கிறது. PCR மதிப்பீடுகள் மற்ற முறைகள் விட குறைந்தது 10,000 மடங்கு அதிகம் என்று ஒரு உணர்வு உள்ள translocation குறிப்பிட்ட புற்றுப்பண்பு உயிரணுக்களின் கண்டறிய மரபணு டிஎன்ஏ மாதிரிகள் நேரடியாக செய்ய முடியும். [சான்று தேவை]

PCR போன்ற மைக்கோபாக்டீரியாவுக்கு, காற்றின்றிவாழ் பாக்டீரியாக்கள், அல்லது திசு வளர்ப்பு மதிப்பீடுகள் மற்றும் விலங்கு மாதிரிகளை இருந்து வைரஸ்கள் என அல்லாத cultivatable அல்லது மெதுவாக வளரும் நுண்ணுயிரிகளை அடையாளம் அனுமதிக்கிறது. நுண்ணுயிரியல் PCR பரிசோதனை பயன்பாடுகளுக்கு அடிப்படை காரணிகளை கண்டறிய மற்றும் குறிப்பிட்ட மரபணுக்கள் தகுதியினால் நோய் விகாரங்கள் இருந்து அல்லாத நோய் பாகுபாட்டிற்கு உள்ளது. [20]

வைரஸ் டிஎன்ஏ இதேபோல் PCR கண்டறிய முடியும். பயன்படுத்தப்படும் முதன்மைபாட நூல்கள வைரஸின் டி இலக்கு வரிசை குறிப்பிட்ட இருக்க வேண்டும், மற்றும் PCR வைரஸ் ஜீனோமை வரிசைப்படுத்துவதன் கண்டறியும் ஆய்வுகள் அல்லது டிஎன்ஏ பயன்படுத்தலாம். PCR அதிக உணர்திறன் விரைவில் தொற்று பிறகு கூட நோய் தொடங்கிய முன் வைரஸ் கண்டறியும் அனுமதிக்கிறது. இத்தகைய ஆரம்ப கண்டறிதல் மருத்துவர்கள் சிகிச்சை குறிப்பிடத்தக்க முன்னணி கொடுக்க கூடும். ஒரு நோயாளியின் வைரஸ் அளவு ("வைரஸ் சுமை") மேலும் PCR சார்ந்த டிஎன்ஏ quantitation நுட்பங்கள் (கீழே காண்க) அளவிட முடியும். அடிப்படை PCR நுட்பம் வேறுபாடுகள் முதன்மை கட்டுரை: PCR மாற்று வடிவங்கள்

   எதிருரு குறிப்பிட்ட PCR: ஒற்றை நியூக்ளியோடைட் பல்லுருத்தோற்றங்கள் (SNPs) (டி ஒற்றை அடிப்படை வேறுபாடுகள்) அடிப்படையில் ஒரு பகுப்பாய்வு அல்லது குளோனிங் தொழில்நுட்பம். இது அல்லீல்கள் இடையே வேறுபாடுகள் உட்பட டிஎன்ஏ வரிசை முன் அறிவு, தேவை, மற்றும் அதன் 3 'SNP கொண்டிருக்கும் முடிவடைகிறது முதன்மைபாட நூல்கள பயன்படுத்துகிறது. கடுமையான சூழ்நிலையில் PCR பெருக்கம் மிகவும் குறைந்த செயல்திறன் டெம்ப்ளேட் மற்றும் பூச்சு, ஒரு காட்சியில் குறிப்பிட்ட SNP ஒரு SNP குறிப்பிட்ட அறிமுகம் சமிக்ஞைகளை இருப்பது மிகவும் வெற்றிகரமான பெருக்கி இடையே பொருத்தமற்ற முன்னிலையில் உள்ளது. [21] மேலும் விவரங்களுக்கு SNP genotyping காண்க.

   சட்டமன்ற PCR அல்லது பாலிமரஸ் சைக்கிள் ஓட்டுதல் சட்டமன்ற (PCA): குறுகிய மேல்விழும் பகுதிகளில் நீண்ட ஒலிகோநியூக்ளியோடைட் ஒரு பூல் மீது PCR மூலம் நீண்ட DNA வரிசைகள் செயற்கை தொகுப்பு. உணர்வு மற்றும் ஆண்டிசென்ஸ் திசைகளில், மற்றும் மேல்விழும் பகுதிகளில் உள்ள மாற்று ஒலிகோநியூக்ளியோடைட், PCR துண்டுகள் வரிசை தீர்மானிக்க மூலம் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட இறுதி நீண்ட டிஎன்ஏ தயாரிப்பு உற்பத்தி. [22]

   சமச்சீரற்ற PCR: முன்னுரிமையளித்து இரட்டை தனித்திருக்கும் டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட்டை ஒரு டிஎன்ஏ அறுத்து அதிகரிக்கிறது. இது வரிசைமுறை மற்றும் இரண்டு நிரப்பு இழைகளாக ஒரே பெருக்கம் தேவை அமைந்துள்ள ஆய்வு கலப்பு பயன்படுத்தப்படுகிறது. PCR வழக்கம் போல் நடத்தியது, ஆனால் பெருக்கி இலக்கு இழையில் ஒரு அறிமுகம் ஒரு பெரிய அதிகப்படியாக. ஏனெனில் மெதுவாக (எண்ணியல்) பெருக்கத்தின் பின்னர் எதிர்வினை உள்ள எல்லை அறிமுகம் வரை பயன்படுத்தப்பட்டு வருகிறது பிறகு, PCR கூடுதல் சுழற்சிகள் தேவைப்படுகிறது. [23] லீனியர்-பிறகு-the-அடுக்குக்குறி-PCR எனப்படும் இந்த செயலாக்கத்தில் ஒரு சமீபத்திய மாற்றம், ( LATE-PCR), எல்லை அறிமுகம் செறிவு நடுப்பகுதியில் எதிர்வினை குறைகிறது என வினை திறன் பராமரிக்க அதிக அறிமுகம் விட அதிக உருகும் வெப்பநிலையை (Tm) ஒரு எல்லை அறிமுகம் பயன்படுத்துகிறது. [24]

   டயல்-வெளியே PCR: மரபணு தொகுப்பு துல்லியமான டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை மீட்டெடுப்பதற்காக மிகவும் இணை முறை. டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை ஒரு சிக்கலான நூலகம் மிகப்பெரும் இணை வரிசைமுறை முன் தனிப்பட்ட flanking குறிகளை கொண்ட திருத்தினோம். Tag-இயக்கிய முதன்மைபாட நூல்கள பின்னர் PCR மூலம் தேவையான காட்சிகளை கொண்ட மூலக்கூறுகள் செய்கின்றன. [25]

   Helicase சார்ந்த பெருக்கம்: பாரம்பரிய PCR போன்ற, ஆனால் ஒரு நிலையான வெப்பநிலை விட இயல்புநீக்கம் மூலம் சைக்கிள் பயன்படுத்துகிறது மற்றும் தூண்டு / நீட்டிப்பு சுழற்சிகள். டிஎன்ஏ helicase, டிஎன்ஏ unwinds ஒரு என்சைம், வெப்ப இயல்புநீக்கம் இடத்தில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. [26]

   வெப்ப தொடக்க PCR: PCR நிலைகளை வரை தொடக்க ஜோடி போது அல்லாத குறிப்பிட்ட பெருக்கி குறைக்கிறது என்று ஒரு உத்தி. இது பாலிமரேஸ் சேர்ப்பதற்கு முன் இயல்புநீக்கம் வெப்பநிலை (எ.கா., 95 டிகிரி செல்சியஸ்) எதிர்வினை கூறுகளை வெப்பமூட்டுவதன் மூலம் கைமுறையாக செய்ய வேண்டும். [27] விசேட என்சைம் அமைப்புகள் பிணைப்பு மூலம் அல்லது, சுற்றுப்புற வெப்பநிலை பாலிமரேஸ் நடவடிக்கையை தடுக்கும் என்று உருவாக்கப்பட்டுள்ளன ஆன்டிபாடி [10] [28] அல்லது ஒரு உயர் வெப்பநிலை செயல்படுத்தும் படி பிறகு தான் பிரிய என்று சகப்பிணைப்பில் கட்டப்படுகிறது மட்டுப்படுத்திகள் இருப்பதால். Hot-start/cold-finish PCR சுற்றுப்புற வெப்பநிலை செயலற்ற மற்றும் உடனடியாக நீட்சி வெப்பநிலையில் செயல்படுத்தப்படுகிறது என்று புதிய வீரிய பாலிமெரேஸ்களிடையே சாதிக்க முடியும்.

   Intersequence குறிப்பிட்ட PCR (ISSR): பெருக்கப்படுகிறது துண்டு நீளம் ஒரு தனிப்பட்ட கைரேகை உருவாக்க எளிய வரிசை திரும்ப இடையே பகுதிகளில் அதிகரிக்கும் டிஎன்ஏ கைரேகை ஒரு PCR முறை [29].

   தலைகீழ் PCR: பொதுவாக மரபணு சேர்க்கைகள் சுற்றி flanking காட்சிகளை கண்டறிய பயன்படுகிறது. இது தெரியாத வரிசை முடிவில் அறியப்பட்ட காட்சிகளின் விளைவாக, டிஎன்ஏ digestions மற்றும் சுய கட்டுகட்டுதல் ஒரு தொடர் அடங்கும். [30]

   கட்டுகட்டுதல் செயலாற்று PCR: வட்டி மற்றும் டிஎன்ஏ லின்கர்கள் செய்ய தூண்டு பல முதன்மைபாட நூல்கள என்ற டிஎன்ஏ ligated சிறிய டிஎன்ஏ லின்கர்கள் பயன்படுத்துகிறது; இது டிஎன்ஏ வரிசைமுறை, மரபணு நடைபயிற்சி, மற்றும் டிஎன்ஏ காலடித்தடமாக்கம் பயன்படுத்தப்பட்டு வருகிறது [31].

   மெதயிலேற்றம் குறிப்பிட்ட PCR (ஒப்புதல்): ஸ்டீபன் Baylin மற்றும் மருத்துவ ஜான்ஸ் ஹாப்கின்ஸ் பள்ளியில் ஜிம் ஹெர்மன், [32] உருவாக்கப்பட்ட மற்றும் மரபணு டிஎன்ஏ உள்ள CpG தீவுகளில் மெதயிலேற்றம் கண்டறிய பயன்படுகிறது. டிஎன்ஏ முதல் thymine என PCR முதன்மைபாட நூல்கள அங்கீகரிக்கப்பட்ட இது uracil, என்று unmethylated cytosine தளங்களை மாற்றி இதில் சோடியம் பைசல்பைட், சிகிச்சை அளிக்கப்படுகிறது. இரண்டு PCRs பின் அறிமுகம் காட்சிகளை எந்த CpG தீவுகளில் உள்ள தவிர ஒரே அறிமுகம் செட் பயன்படுத்தி, மாற்றம் டிஎன்ஏ கொண்டுவரப்படுகின்றன. இந்த புள்ளிகளில், ஒரு அறிமுகம் தொகுப்பு மெத்திலேற்றப்பட்ட டிஎன்ஏ பெருக்க cytosines மூலம் டிஎன்ஏ அங்கீகரிக்கிறது, மற்றும் ஒரு தொகுதி unmethylated டிஎன்ஏ பெருக்க uracil அல்லது thymine மூலம் டிஎன்ஏ அங்கீகரிக்கிறது. QPCR பயன்படுத்தி ஒப்புதல் மேலும் மாறாக மெதயிலேற்றம் பற்றி தர தகவலை விட அளவு பெற முடியும்.

   Miniprimer PCR: 9 அல்லது 10 நியூக்ளியோட்டைடுகள் போன்ற குறுகிய போன்ற குறுகிய முதன்மைபாட நூல்கள ("smalligos") இருந்து நீட்டிக்க முடியும் என்று ஒரு thermostable பாலிமரேஸ் (S-Tbr) பயன்படுத்துகிறது. இந்த முறை PCR சிறிய அறிமுகம் கட்டமைப்பு பகுதிகளுக்கு இலக்கு, மற்றும் rRNA மரபணு போன்ற 16S (அல்லது யூகார்யோடிக் 18S) போன்ற பாதுகாக்கப்பட்ட DNA வரிசைகள், பெருக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது அனுமதிக்கிறது. [33]

   பல கட்டுகட்டுதல் சார்ந்த ஆய்வு பெருக்கம் (MLPA): இதனால், பல PCR (கீழே காண்க) தீர்மானம் வரம்புகள் தவிர்த்து, ஒரே ஒரு அறிமுகம் ஜோடி அதிகரிக்க செய்யப்படலாம் பல இலக்குகளை அனுமதிக்கிறது.

   பல-PCR: வெவ்வேறு DNA வரிசைகள் குறிப்பிட்ட அந்த அளவுகள் மாறுபடும் amplicons உருவாக்க ஒரு PCR கலவையை பல அறிமுகம் பெட்டிகள் உள்ளன. ஒரே நேரத்தில் பல மரபணுக்கள் இலக்காக கொண்டு, கூடுதல் தகவல் மற்றபடி பல முறை reagents மற்றும் செய்ய அதிக நேரம் தேவைப்படுகிறது என்று சோதனை நடத்தும் ஒற்றை இருந்து பெற்றது. அறிமுகம் செட் ஒவ்வொரு தூண்டு வெப்பநிலை ஒரு எதிர்வினை உள்ள சரியாக வேலை செய்ய உகந்ததாக, மற்றும் amplicon அளவுகள். அவர்களின் அடிப்படை ஜோடி நீளம் ஜெல் மின் மூலம் மனதில் போது தனித்துவமான பட்டைகள் அமைக்க போதுமான வேறு இருக்க வேண்டும், இல்லை.

   உள்ளமை PCR: டிஎன்ஏ அல்லாத குறிப்பிட்ட பெருக்கம் காரணமாக பின்னணி குறைப்பதன் மூலம், டிஎன்ஏ பெருக்கி வரையறுப்பு அதிகரிக்கிறது. முதன்மைபாட நூல்கள இரண்டு பெட்டிகள் இரண்டு அடுத்தடுத்த PCRs பயன்படுத்தப்படுகின்றன. முதல் வினையில், முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு ஜோடி நோக்கம் இலக்கு தவிர, இன்னும் அல்லாத குறிப்பாக பெருக்கப்படுகிறது டிஎன்ஏ துண்டுகள் கொண்டிருக்கும் இதில் டிஎன்ஏ தயாரிப்புகள், உருவாக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. தயாரிப்பு (கள்) பின்னர் அதன் பிணைப்பு தளங்களை முழுமையாக அல்லது பகுதியாக உள்ளன மற்றும் முதல் விளைவு பயன்படுத்தப்படும் முதன்மைபாட நூல்கள ஒவ்வொரு 3 'அமைந்துள்ள முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு ஜோடி இரண்டாவது PCR பயன்படுத்தப்படுகின்றன. உள்ளமை PCR குறிப்பாக வழக்கமான PCR விட நீண்ட டிஎன்ஏ துண்டுகள் பன்மடங்காகி பெரும்பாலும் வெற்றி, ஆனால் இலக்கு காட்சிகளை இன்னும் விரிவான அறிவு தேவைப்படுகிறது.

   மேல்படிவின்-நீட்டிப்பு PCR அல்லது மேல்படிவின் நீட்டிப்பு (SOE) மூலம் பிளக்கின்ற: நிரப்பு காட்சிகளை கொண்ட இரண்டு அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட டிஎன்ஏ துண்டுகள் ஒன்றாக கயிற்றின் இழைகளை இணை பயன்படுத்தப்படும் என்று ஒரு மரபணு பொறியியல் தொழில் நுட்பம். இது மரபணுக்கள், ஒழுங்குமுறை தொடர்கள், அல்லது பிறழ்வுகள் கொண்ட டிஎன்ஏ துண்டுகளை சேர பயன்படுத்தப்படுகிறது; நுட்பம் குறிப்பிட்ட மற்றும் நீண்ட டிஎன்ஏ கட்டமைப்புகளை உருவாக்க உதவுகிறது.

   அளவு PCR (qPCR): ஒரு PCR தயாரிப்பு அளவு (பொதுவாக நிகழ்நேரத்தில்) அளவிட பயன்படுத்தப்படுகிறது. அதை அளவு தொடங்கும் cDNA டிஎன்ஏ அளவு, அல்லது ஆர்என்ஏ அளவிடும். qPCR பொதுவாக ஒரு டிஎன்ஏ வரிசை மாதிரி ஒரு மாதிரி மற்றும் அதன் நகல்கள் எண்ணிக்கை தற்போது என்பதை தீர்மானிக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது. அளவு உண்மை நேரம் PCR துல்லியமான ஒரு மிக அதிக அளவு உள்ளது. QRT-PCR (அல்லது QF-PCR) முறைகள் உண்மையான நேரம் பெருக்கப்படுகிறது தயாரிப்பு அளப்பதற்கு போன்ற Sybr பசுமை, EvaGreen அல்லது TaqMan என fluorophore கொண்டிருக்கும் டி.என்.ஏ. ஆய்வுகள், போன்ற ஒளிரும் சாயங்கள், பயன்படுத்த. இது சில நேரங்களில் ஆர்-PCR (ரியல் டைம் PCR) அல்லது RQ-PCR என சுருக்கமாக. ஆர்-PCR பொதுவாக அடிக்கடி qPCR உடன் பயன்படுத்தப்படும் படியெடுத்தல் PCR (கீழே காண்க), தலைகீழாக குறிக்கிறது இருந்து QRT-PCR அல்லது RTQ-PCR, மேலும் பொருத்தமான சுருக்கங்கள் இருக்கும்.

   தலைகீழ் பெயர்த்தெழுதுதல் PCR (ஆர்டி-PCR): ஆர்என்ஏ இருந்து டிஎன்ஏ பன்மடங்காகி இடம். பின்திரும்பல் தலைகீழ் பின்னர் PCR பெருக்கவும் இது, cDNA ஒரு ஆர்என்ஏ டிரான்ஸ்கிரிப்ஷன். ஆர்-PCR பரவலாக ஒரு மரபணு வெளிப்பாடு தீர்மானிக்க அல்லது படியெடுத்தல் தொடக்க மற்றும் முடிவு தளங்கள் உட்பட ஒரு ஆர்என்ஏ தமிழாக்கம், வரிசையில் அடையாளம், வெளிப்பாடு விவரக்குறிப்புக்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது. ஒரு மரபணுவின் மரபணு டிஎன்ஏ வரிசை அறியப்படுகிறது என்றால், ஆர்-PCR மரபணுவில் எக்சோன்களை மற்றும் இண்ட்ரோன்களை இடம் கண்டறிவதில் பயன்படுத்தப்பட்டது. ஒரு மரபணு 5 'இறுதியில் (படியெடுத்தல் தொடக்க தளம் தொடர்பான) பொதுவாக இனம்-PCR (cDNA முனைகள் விரைந்து பெருக்கம்) அடையாளம்.

   திட நிலை PCR: Polony பெருக்கம் (அங்கு PCR காலனிகளில் எடுத்துக்காட்டாக, ஒரு ஜெல் அணி பெறப்படுகிறது) உட்பட பல அர்த்தங்கள், சூழ்ந்து, பிரிட்ஜ் PCR [34] (முதன்மைபாட நூல்கள சகப்பிணைப்பில் ஒரு திட ஆதரவு மேற்பரப்பில் இணைக்கப்பட்டிருக்கும்), வழக்கமான திட நிலை PCR (அங்கு சமச்சீரற்ற PCR வரிசை அக்வஸ் முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு பொருந்தக்கூடிய திட ஆதரவு தாங்கி அறிமுகம் முன்னிலையில் பொருந்தும்) மற்றும் மேம்படுத்தப்பட்ட திண்ம நிலை PCR [35] (வழக்கமான திட நிலை PCR உயர் Tm மற்றும் விருப்ப பயன்பாட்டில் உள்ளமை திட ஆதரவு குழாய் மூலம் மேம்படுத்தப்பட்டது முடியும் ஒரு வெப்ப 'படி' என்ற) திட ஆதரவு டேங்குக்கு ஆதரவளிப்பதாக.

   வெப்ப சமச்சீரற்ற ஒன்று PCR (வால்-PCR): ஒரு அறியப்படுகிறது வரிசை flanking அறியப்படாத ஒரு காட்சியில் தனிமைப்படுத்துவதற்கான. என்று வரிசை உள்ள, வால்-PCR தூண்டு வெப்பநிலை வேறுபடுகின்ற முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு உள்ளமை ஜோடி பயன்படுத்துகிறது; ஒரு சிதைந்த அறிமுகம் தெரியவில்லை காட்சியில் இருந்து மற்ற திசையில் பெருக்க பயன்படுத்தப்படுகிறது [36].

   Touchdown PCR (படி, கீழே PCR): PCR சைக்கிள் முன்னேறும் என படிப்படியாக தூண்டு வெப்பநிலை குறைத்து குறிப்பிடப்படாத பின்னணி குறைக்க நோக்கம் என்று PCR ஒரு மாறுபாடு. பின்னர் சுழற்சிகள் நேரத்தில், அதை அறிமுகம் Tm கீழே ஒரு சில டிகிரி (3-5 ° C) போது ஆரம்ப சுழற்சிகள் உள்ள தூண்டு வெப்பநிலை, பொதுவாக பயன்படுத்தப்படும் முதன்மைபாட நூல்கள என்ற Tm மேலே ஒரு சில டிகிரி (3-5 ° C) ஆகும். அதிக வெப்பநிலையில் அறிமுகம் பிணைப்பு அதிக துல்லியம் கொடுக்க, மற்றும் குறைந்த வெப்பநிலை ஆரம்ப சுழற்சிகள் போது அமைக்கப்பட்ட குறிப்பிட்ட தயாரிப்புகள் இருந்து திறமையான பெருக்கி அனுமதி. [37]

   நிரந்தர கணக்கு எண், ஏசி:. பெருக்கத்திற்காக சமவெப்ப நிலைமைகள் பயன்படுத்துகிறது, மற்றும் வாழ்க்கை செல்களில் பயன்படுத்தப்படும் [38] [39]

   உலகளாவிய ஃபாஸ்ட் பாரம்பரிய: வழக்கமான 'ஒரு தலை' அணுகுமுறைகளை விட குறிப்பிட்ட 'இரண்டு முகம்' PCR பயன்படுத்தி மரபணு நடைபயிற்சி மற்றும் மரபணு கைரேகை க்கு (ஒரே ஒரு மரபணு குறிப்பிட்ட பூச்சு மற்றும் ஒரு பொது அறிமுகம் பயன்படுத்தி - artefactual 'சத்தம்' உண்டாக்கும்) [40] குதிரை அமைப்பு உருவாக்கம் சம்பந்தப்பட்ட ஒரு அமைப்பு என்ற தகுதியினால். UFW என்ற நெறிப்படுத்தப்பட்ட வழித்தோன்றல்கள் லேன் ரேஜ் (ஜெநோமிக் DNA முனைகளிலும் விரைவான பெருக்கத்திற்காக குதிரை சார்ந்த உள்ளமை PCR) ஆகும், [41] 5'RACE லேன் [42] மற்றும் 3'RACE லேன். [43]

   சிலிக்கோவில் PCR (டிஜிட்டல் PCR, மெய்நிகர் PCR, மின்னணு PCR, மின் PCR) ஒரு வரிசைமுறை மரபணு அல்லது transcriptome இருந்து டிஎன்ஏ வரிசை பெருக்க முதன்மைபாட நூல்கள (ஆய்வுகள்) கொடுக்கப்பட்ட தொகுப்பை பயன்படுத்தி கோட்பாட்டு பாலிமரேஸ் முடிவு கணக்கிட பயன்படுத்தப்படும் கணிப்பு கருவிகள் குறிக்கிறது.

வரலாறு முதன்மை கட்டுரை: வரலாறு பாலிமரேஸ் பற்றி

Kleppe மற்றும் சக தொழிலாளர்கள் மூலக்கூறு உயிரியல் ஜர்னல் ஆஃப் ஒரு 1971 காகித முதல். [44] எனினும், அடிப்படை PCR கொள்கை இந்த ஆரம்ப வெளிப்பாடாக பெறவில்லை வெளி சோதனை முதன்மைபாட நூல்கள ஒரு குறுகிய டிஎன்ஏ டெம்ப்ளேட் பெருக்கும் ஒரு என்சைம் மதிப்பீட்டு பயன்படுத்தி ஒரு முறை விவரித்தார் அதிக கவனம், மற்றும் 1983 ல் பாலிமரேஸ் கண்டுபிடிப்பு பொதுவாக கேரி Mullis சாரும். [45]

Mullis 1983 ல் PCR வளர்ந்த போது, அவர் Cetus கார்ப்பரேஷன், முதல் உயிரிதொழில்நுட்ப நிறுவனங்களில் ஒன்று, கலிபோர்னியா Emeryville வேலை. அங்கு, அவர் டிஎன்ஏ குறுகிய சங்கிலிகள் செயற்கை பொறுப்பு. Mullis தனது காரில் ஒரு இரவு பசிபி கோஸ்ட் நெடுஞ்சாலை வழியாக cruising போது அவர் PCR வெளிப்படுத்தினர் என்று எழுதியுள்ளார். [46] அவர் அதற்கு பதிலாக கண்டுபிடித்தார் என்று உணர்ந்த போது அவர் டிஎன்ஏ மாற்றங்கள் (பிறழ்வுகள்) ஆய்வு ஒரு புதிய வழி அவரது மனதில் விளையாடும் டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் இயக்கப்படுகிறது பிரதிபலிப்பில் மீண்டும் மீண்டும் சுழற்சிகள் மூலம் எந்த டிஎன்ஏ பகுதியில் பன்மடங்காகி ஒரு முறை. அறிவியல் அமெரிக்க உள்ள, Mullis செயல்முறை சுருக்கி:.. "மரபணு மூலப்பொருள்கள் டிஎன்ஏ ஒரு ஒற்றை மூலக்கூறு தொடங்கி, PCR ஒரு மதியம் 100 பில்லியன் போன்ற மூலக்கூறுகளை உருவாக்க முடியும் எதிர்வினை இயக்க எளிது இது, ஒரு சோதனை குழாய் மேல் தேவை ஒரு சில எளிய reagents, மற்றும் வெப்பம் மூலமாக. "[47] அவர் மற்றும் Cetus தனது சக முதல் பயிற்சி அவரது திட்டம் போட்டு ஏழு ஆண்டுகளுக்கு பிறகு அவரது கண்டுபிடிப்பு, [4] 1993 ஆம் ஆண்டில் வேதியியலுக்கான நோபல் பரிசு வழங்கப்பட்டது. எனினும், சில சர்ச்சைகள் Mullis 'வேலை மற்ற விஞ்ஞானிகள் அறிவார்ந்த மற்றும் நடைமுறை பங்களிப்பு பற்றி இருந்தது, மற்றும் அவர் (கீழே காண்க) PCR கொள்கை ஒரே கண்டுபிடிப்பாளர் இருந்தது என்பதை.

PCR முறை முக்கிய at> 90 அதிக வெப்பம் தாங்க முடியாமல் ஒரு பொருத்தமான டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் பயன்பாடு ° C (194 ° F) ஒவ்வொரு போலிகளை சுழற்சி பின்னர் டிஎன்ஏ இரட்டை சுருள் இரண்டு டிஎன்ஏ இழைகளாக பிரித்து தேவைப்படும். ஆரம்பத்தில் PCR presaging ஆய்வுக்கூட சோதனைகள் இல் வேலை டிஎன்ஏ பாலிமெரேஸ்களிடையே இந்த அதிக வெப்பம் தாங்க முடியவில்லை. [2] எனவே டிஎன்ஏ நகல் ஆரம்ப நடைமுறைகள் நுகரும் மிகவும் திறனற்ற மற்றும் நேரம், மற்றும் டிஎன்ஏ பல்படியாக்கு மற்றும் செயல்முறை முழுவதும் தொடர்ச்சியான கையாளுதல் தேவையான அதிக அளவு.

Taq பாலிமரேஸ் மற்றும் 1976 ல் கண்டுபிடிப்பு - நடைபாதை - இயற்கையாக (50 முதல் 80 டிகிரி செல்சியஸ் 176 க்கு (122 டிகிரி பாரன்ஹீட்)) சூழல்கள் போன்ற வெப்ப நீரூற்றுகள் போன்ற [11] வெப்ப வசித்து இது வெப்ப ஈர்ப்பு பாக்டீரியம், Thermus aquaticus இருந்து சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஒரு டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் PCR முறை வியத்தகு முன்னேற்றங்கள் வழி. டி aquaticus இருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்டு டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் கூட டிஎன்ஏ இயல்புநீக்கம் பின்னர் செயலில் மீதமுள்ள அதிக வெப்பநிலையில் நிலையாக, [12] இவ்வாறு ஒவ்வொரு சுழற்சி பிறகு புதிய டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் சேர்க்க வேண்டும் obviating. [3] இந்த டிஎன்ஏ பெருக்கம் ஒரு தானியங்கி thermocycler சார்ந்த செயல்முறை அனுமதி . காப்புரிமை போர்கள்

PCR நுட்பம் கேரி Mullis மூலம் காப்புரிமை மற்றும் அவர் 1983 ல் நுட்பத்தை கண்டுபிடித்த போது Mullis பணிபுரிந்தார் Cetus கார்ப்பரேஷன், ஒதுக்கப்படும். Taq பாலிமரேஸ் என்சைம் மேலும் காப்புரிமைகள் கவரப்பட்டிருந்தது. த்யூபொன் கொண்டு ஒரு தோல்வி வழக்கு உட்பட நுட்பம் தொடர்பான பல உயர் வழக்குகள், உள்ளன. மருந்து நிறுவனம் ஹோப்மேன் லா ரோச்சே 1992 ல் காப்புரிமை உரிமையை வாங்கி தற்போது இன்னும் பாதுகாக்கப்படுகிறது என்று அந்த பெற்றுள்ளார்.

Taq பாலிமரேஸ் என்சைம் மீது தொடர்புடைய காப்புரிமை போர் ரோச் மற்றும் Promega இடையே உலகம் முழுவதும் பல வழக்குகளில் இன்னும் நடந்து வருகிறது. சட்ட வாதங்கள் மார்ச் 28 அன்று காலாவதியானது இது அசல் PCR மற்றும் Taq பாலிமரேஸ் காப்புரிமைகள், 2005 உயிர்களை அப்பால் நீட்டிக்கப்பட்டது. [48] குறிப்புகள்

   ^ பார்ட்லெட், ஜே எம் எஸ், ஸ்டிர்லிங், டி (2003). "பாலிமரேஸ் ஒரு குறுகிய வரலாறு". PCR நெறிமுறைகள். 226. பக் 3-6. டோய்: 10.1385/1-59259-384-4: 3. ஐஎஸ்பிஎன் 1-59259-384-4. திருத்த
   ^ AB Saiki, ஆர்; Scharf, எஸ்; Faloona, எப்; Mullis, கே; கொம்பு, ஜி; Erlich, எச்; Arnheim, என் (1985). "பீட்டா குளோபின் மரபணு வரிசை மற்றும் சிக்கில் செல் இரத்த சோகை ஆய்வுக்கு தடை தளம் பகுப்பாய்வு நொதிய பெருக்கம்". அறிவியல் 230 (4732): 1350-1354. டோய்: 10.1126/science.2999980. PMID 2999980. திருத்த
   ^ AB Saiki, ஆர்; ஜெல்ஃபேன்ட், டி; Stoffel, எஸ்; Scharf, எஸ்; Higuchi, ஆர்; கொம்பு, ஜி; Mullis, கே; Erlich, எச் (1988). "ஒரு thermostable டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் உடன் டிஎன்ஏ நொதித்தல் பெருக்கி முதன்மையானது இயக்கிய". அறிவியல் 239 (4839): 487-491. டோய்: 10.1126/science.2448875. PMID 2448875. திருத்த
   ^ ஒரு கேட்ச் கேரி Mullis நோபல் லெக்சர், டிசம்பர் 8, 1993
   ^ செங், எஸ்; Fockler, சி; பர்ன்ஸ், WM; Higuchi, ஆர் (1994). "க்ளோன் செருகி மற்றும் மனித மரபியல் டிஎன்ஏ இருந்து நீண்ட இலக்குகள் சிறப்பான பெருக்கம்". அறிவியல் 91 தேசிய அகாடமி (12) விசாரணை: 5695-5699. டோய்: 10.1073/pnas.91.12.5695. பிஎம்சி 44063. PMID 8202550. திருத்த
   ^ கார் ஏசி, மூர் எஸ்டி (2012). லூசியா, Alejandro. எட். "பாலிமரேஸ் வினைகளின் ஆரோக்கியமான குவாண்டிஃபிக்கேஷன் உலக பொருத்தி பயன்படுத்தி". PloS ஒரு 7 (5): e37640. டோய்: 10.1371/journal.pone.0037640. பிஎம்சி 3365123. PMID 22701526.
   ^ ஒரு கேட்ச் ஜோசப் Sambrook மற்றும் டேவிட் டபிள்யூ Russel (2001). மூலக்கூறு க்ளோன்: ஒரு ஆய்வுக்கூடம் கையேடு (3 வது பதிப்பு.). கோல்ட் ஸ்பிரிங் ஹார்பர், NY: கோல்ட் ஸ்பிரிங் ஹார்பர் ஆய்வகம் பிரஸ். ஐஎஸ்பிஎன் 0-879-69576-5. அத்தியாயம் 8: பாலிமரேஸ் மூலம் டிஎன்ஏ செயற்கை பெருக்கத்தில்
   ^ பாவ்லோவ், ஏ; பவ்லோவா, NV; Kozyavkin, எஸ்.ஏ.; Slesarev, AI (2004). "திறமையான பயன்பாடுகளுக்கு thermostable டிஎன்ஏ பாலிமெரேஸ்களிடையே உகம அண்மைய அபிவிருத்திகள் ☆". பயோடெக்னாலஜி 22 போக்கு (5): 253-260. டோய்: 10.1016/j.tibtech.2004.02.011. PMID 15109812. திருத்த
   ^ Rychlik W, ஸ்பென்சர் WJ, ரோட்ஸ் RE (1990). "இன் விட்ரோ உள்ள டிஎன்ஏ பெருக்கத்திற்காக தூண்டு வெப்பநிலை ஆப்டிமைசேஷன்". Nucl அமிலங்கள் ரெஸ் 18 (21): 6409-6412. டோய்: 10.1093/nar/18.21.6409. பிஎம்சி 332522. PMID 2243783.
   ^ AB Sharkey, டி.ஜே.; Scalice, ER; கிறிஸ்டி, கே.ஜி.; அட்வுட், SM; Daiss, JL (1994). "Thermolabile சுவிட்சுகள் என நோய்எதிர்ப்பு: பாலிமரேஸ் முடுக்கும் உயர் வெப்பநிலை". உயிர் / தொழில்நுட்ப 12 (5): 506-509. டோய்: 10.1038/nbt0594-506. திருத்த
   ^ ஒரு கேட்ச் செயின் ஒரு, எட்கர் டி.பி., Trela ஜேஎம் (1976). "தீவிர தட்பவெப்ப நிலையில் வாழும் உயிர் Thermus aquaticus இருந்து Deoxyribonucleic அமிலம் பாலிமரேஸ்". ஜே பாக்டீரியலாஜி 127 (3): 1550-1557. பிஎம்சி 232952. PMID 8432.
   ^ AB வழக்கறிஞர், எப்; Stoffel, எஸ்; Saiki, ஆர்; சாங், எஸ்; Landre, பி; Abramson, ஆர்; ஜெல்ஃபேன்ட், டி (1993). "உயர் மட்ட வெளிப்பாடு, சுத்திகரிப்பு, மற்றும் முழு நீள Thermus aquaticus டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் மற்றும் exonuclease நடவடிக்கை '3' 5 மட்டு ஒரு மட்டுப்படுத்தப்பட்டுள்ளது வடிவம் நொதிய பாத்திரப்படைப்பு". PCR முறைகள் மற்றும் பயன்பாடுகள் 2 (4): 275-287. PMID 8324500. திருத்த
   ^ கேம்பெல் உயிரியல், 7 வது பதிப்பு
   ^ சிக்கல் வார்ப்புருக்கள் இருந்து PCR. 22:1 ப .10 (2000) கவனம்.
   PCR ^ த உதவும் குறிப்புகள். 22:1 ப .12 (2000) கவனம்.
   ^ சர்க்கார், ஜி; Kapelner, எஸ்; சோம்மர், எஸ் (1990). "Formamide வியத்தகு PCR வரையறுப்பு மேம்படுத்த முடியும்". நியூக்ளிக் அமிலங்கள் ஆராய்ச்சி 18 (24): 7465. டோய்: 10.1093/nar/18.24.7465. பிஎம்சி 332902. PMID 2259646. திருத்த
   ^ "எலக்ட்ரானிக் PCR". என்சிபிஐ - தேசிய உயிர்தொழில்நுட்ப தகவல் மையம். மார்ச் 2012 13 பெறப்பட்டது.
   ^ பாவ்லோவ் ஏ, பவ்லோவா NV, Kozyavkin எஸ்.ஏ., Slesarev AI (2006). "பயன்பாடுகள் ஒரு உலகளாவிய ஸ்பெக்ட்ரம் ஐந்து Thermostable டிஎன்ஏ பாலிமெரேஸ்களிடையே: மற்ற என்சைம்கள் ஒரு ஆரோக்கியமான கலப்பின TopoTaq ஒப்பீடு". ஏற்புடையதாக்கல் தயாரித்தல் மற்றும் துப்புரவு: Kieleczawa ஜே டிஎன்ஏ தொடர்வரிசையாக்கம் இரண்டாம். ஜோன்ஸ் அண்ட் பார்ட்லெட். பக் 241-257. ஐஎஸ்பிஎன் 0-7637-3383-0.
   ^ "டிஎன்ஏ இரசாயன கலப்பு, தொடர்வரிசையாக்கம், மற்றும் பெருக்கம் (MBB / BIO 343 இல் வர்க்கம் குறிப்புகள்)". அரிசோனா மாநில பல்கலைக்கழகம். 2007-10-29 அன்று தகவல் பெறப்பட்டது.
   ^ Salis கி.பி. (2009). "மருத்துவ நுண்ணுயிரியல் உள்ள பயன்பாடுகள்". நிகழ் நேரம் PCR: தற்போதைய தொழில்நுட்ப மற்றும் பயன்பாடுகள். Caister அகாடமிக் பிரஸ். ஐஎஸ்பிஎன் 978-1-904455-39-4.
   ^ நியூட்டன் CR, கிரகாம் ஒரு, Heptinstall LE, பவல் எஸ்.ஜே., சம்மர்ஸ் சி, Kalsheker N, ஸ்மித் ஜே.சி., மற்றும் Markham AF (1989). "டிஎன்ஏ எந்த புள்ளி திடீர் ஆய்வு. பெருக்கம் பலனளிக்காத விகாரம் கணினி (ஆயுத)". நியூக்ளிக் அமிலங்கள் ஆராய்ச்சி 17 (7): 2503-2516. டோய்: 10.1093/nar/17.7.2503. பிஎம்சி 317639. PMID 2785681.
   ^ Stemmer WP, Crameri ஒரு, ஹா கேடி, ப்ரென்னான் டிஎம், Heyneker தலைப்பு (1995). "ஒரு மரபணு மற்றும் oligodeoxyribonucleotides பெரிய எண்ணிக்கையில் இருந்து பிளாஸ்மிட் முழு ஒற்றை படி சட்டமன்ற". மரபணு 164 (1): 49-53. டோய்: 10.1016/0378-1119 (95) 00511-4. PMID 7590320.
   ^ Innis எம்.ஏ., Myambo KB, ஜெல்ஃபேன்ட் டிஎச், புருவம் MA. (1988). "Thermus aquaticus டி.என்.ஏ. பாலிமரேஸ் மற்றும் பாலிமரேஸ் பெருக்காத டிஎன்ஏ நேரடி வரிசைப்படுத்துதலிலும் டிஎன்ஏ வரிசைமுறை". Proc தேசிய அகாடமி நவீன அறிவியல் மற்றும் அமெரிக்கா 85 (24): 9436-4940. டோய்: 10.1073/pnas.85.24.9436. பிஎம்சி 282767. PMID 3200828.
   ^ பியர்ஸ் கே மற்றும் Wangh LJ (2007). "லீனியர்-பிறகு-the-அடுக்கடுக்கான பாலிமரேஸ் மற்றும் ஒற்றை உயிரணுக்கள் இருந்து விரைவான, நம்பகமான ஆய்வுக்கு சார்ந்த தொழில்நுட்பங்கள் ரியல் நேர கண்டறிதல் உத்திகள்". முறைகள் மோல் மெட் .. மூலக்கூறு மருத்துவம் ™ 132 இல் முறைகள்: 65-85. டோய்: 10.1007/978-1-59745-298-4_7. ஐஎஸ்பிஎன் 978-1-58829-578-1. PMID 17876077.
   ^ ஸ்க்வார்ட்ஸ் ஜே.ஜே., லீ சி, Shendure ஜே (2012). "வரிசை சரிபார்க்கும் டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளை டேக் இயக்கிய பெறுதல் மூலம் துல்லியமாக மரபணு தொகுப்பு". இயற்கை முறைகள் 9: 913-915. டோய்: 10.1038/nmeth.2137. PMID 22886093.